本次實驗選擇金銀花配方顆粒樣品,使用悟空Wooking K2025高效液相色譜儀對其進行檢測,實驗結果符合標準,儀器可用于中藥配方顆粒特征圖譜的表征。
1、儀器與設備:悟空K2025高效液相色譜儀;分析天平(精確到0.0001g);渦旋振蕩器;超聲波清洗機;容量瓶(10mL,棕色帶刻度);具塞錐形瓶(100mL,棕色)。
悟空Wooking K2025高效液相色譜儀
2、試劑與材料:符合GB/T6682的一級水;甲醇(色譜級);乙腈(色譜純);磷酸(色譜純);綠原酸對照品(純度為99.73%);蘆丁對照品(純度為99.51%);木犀草苷對照品(純度為98.58%);0.22 μm有機相濾膜。
02 樣品前處理
參照物溶液的制備:取綠原酸對照品、木犀草苷對照品、蘆丁對照品,置棕色容量瓶中,加50%甲醇制成每1mL各含40μg的混合溶液(10℃以下保存);
供試品溶液的制備:取本品適量,研細,取0.4g,置具塞錐形瓶中,加入50%甲醇50mL,超聲處理(功率250W,頻率35kHz) 45min,取出放冷,過濾即得。
03 色譜條件
①色譜柱: C18 4.6×250mm,5μm或者相當色譜柱
②流動相A:乙腈;流動相B:0.4%磷酸溶液,梯度洗脫程序表如下:
③柱溫:35℃
④進樣量:10μL(參照物溶液)、15μL(供試品溶液)
⑤流速:1.0mL/min
⑥波長:350nm
04 結果與討論
1、參照物溶液的色譜圖如圖1所示:
圖1參照物溶液色譜圖
2、供試品溶液的色譜圖如圖2所示,供試品色譜中呈現8個特征峰,與對照藥材參照物色譜中的8個特征峰的保留時間相對應,其中峰2、峰4、峰5分別與相應的對照品參照物峰的保留時間相對應。
圖2供試品溶液色譜圖
(峰2(S):綠原酸;峰4:蘆??;峰5:木犀草苷)
3、供試品溶液色譜圖積分表見表1,以綠原酸參照物峰相應的峰為S峰,計算各特征峰與S峰的相對保留時間,各特征峰的相對保留時間均在規定值的±10%范圍之內。
表1 供試品溶液色譜峰積分表
05 結論
實驗結果表明,使用悟空Wooking K2025高效液相色譜儀測定金銀花配方顆粒,供試品溶液的特征峰個數與《金銀花配方顆?!窐藴手幸幎ǖ奶卣鞣鍌€數一致,且相對保留時間均在規定值的±10%范圍之內;其中木犀草苷峰的理論塔板數為107862,完全滿足標準中規定其理論塔板數不低于2000的要求。因此,悟空Wooking K2025高效液相色譜儀可用于中藥配方顆粒特征圖譜的表征。