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本文使用悟空K2025高效液相色譜儀測定西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。其連續進樣7針的峰面積的重復性完全滿足2020年版《中國藥典》的要求。
二、背景
西洋參具有補氣養陰，清熱生津。用于氣虛陰虧，虛熱煩倦，咳喘痰血，內熱消渴，口燥咽干。西洋參為市場上較為常見的名貴藥材，其主要的活性成分為皂苷類，如人參皂苷Re、人參皂苷Rb1等。在2020年版《中國藥典》中規定了利用高效液相色譜法測定西洋參中人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1的含量以控制藥物的質量。
三、實驗過程
1 范圍
適用于西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的測定。
2 原理
人參皂苷Rg1、Re、Rb1易溶于甲醇，在203nm處有紫外吸收，使用高效液相色譜法進行檢測，外標法定量。
3 試劑與材料
3.1 水：符合GB/T6682的一級水；
3.2 乙腈：色譜純；
3.3 磷酸：優級純；
3.4 0.1%磷酸水溶液：吸取1mL磷酸用一級水定容至1L，過0.22μm濾膜。
4 儀器與設備
4.1 高效液相色譜儀：K2025 P2二元高壓梯度輸液泵、K2025 AS自動進樣器、K2025 CO柱溫箱、K2025 UVD紫外-可見光檢測器；Wookinglab色譜工作站
5 測定步驟
5.1樣品前處理
對照品溶液制備：取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL各含人參皂苷Rg1 0.1mg、人參皂苷Re 0.4mg、人參皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。
供試品溶液制備：取本品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50mL，稱定重量，置水浴中加熱回流提取1.5小時，放冷，再稱定重量，用水飽和正丁醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25mL，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加50%甲醇適量使溶解，轉移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
5.2 色譜條件：
a）色譜柱：C18 4.6×250mm，5μm；
b）流動相：A：乙腈；B：0.1%磷酸水溶液；
c）柱溫：40℃；
d）進樣量：10μL；
e）流速：1mL/min；
f）波長：203nm；
h）梯度洗脫程序見表1：
表1 梯度洗脫程序
|
時間/min |
A%（乙腈） |
B%（0.1%磷酸水溶液） |
|
0 |
19 |
81 |
|
25 |
20 |
80 |
|
60 |
40 |
60 |
|
90 |
55 |
45 |
|
100 |
60 |
40 |
|
110 |
19 |
81 |
|
120 |
19 |
81 |
6 色譜圖及重復性結果
對照品參考色譜圖如圖1
圖1. 對照品參考色譜圖
對照品進樣7針的色譜圖疊加圖如圖2
圖2. 進樣7針對照品色譜圖的疊加圖
表2 進樣7針對照品重復性計算結果
|
峰1 Rg1 |
|
對照品1 |
對照品2 |
對照品3 |
對照品4 |
對照品5 |
對照品6 |
對照品7 |
平均值 |
SD |
RSD% |
|
保留時間 |
33.760 |
33.818 |
33.675 |
33.755 |
33.685 |
33.747 |
33.675 |
33.731 |
0.054 |
0.161 |
|
|
峰面積 |
406.775 |
406.708 |
409.409 |
410.531 |
407.131 |
407.826 |
410.157 |
408.362 |
1.637 |
0.401 |
|
|
峰2 Re |
|
對照品1 |
對照品2 |
對照品3 |
對照品4 |
對照品5 |
對照品6 |
對照品7 |
平均值 |
SD |
RSD% |
|
保留時間 |
34.550 |
34.602 |
34.470 |
34.542 |
34.482 |
34.532 |
34.472 |
34.521 |
0.049 |
0.142 |
|
|
峰面積 |
1203.446 |
1205.585 |
1212.382 |
1214.792 |
1204.29 |
1206.646 |
1213.277 |
1208.631 |
4.700 |
0.389 |
|
|
峰3 Rb1 |
|
對照品1 |
對照品2 |
對照品3 |
對照品4 |
對照品5 |
對照品6 |
對照品7 |
平均值 |
SD |
RSD% |
|
保留時間 |
54.850 |
54.860 |
54.808 |
54.873 |
54.813 |
54.84 |
54.833 |
54.840 |
0.024 |
0.043 |
|
|
峰面積 |
2855.097 |
2858.418 |
2876.438 |
2878.897 |
2856.686 |
2860.233 |
2877.542 |
2866.187 |
10.837 |
0.378 |
供試品參考色譜圖如圖3
圖3 供試品參考色譜圖
進樣7針供試品色譜圖疊加圖如圖4
圖4 進樣7針供試品色譜圖疊加圖
表3 進樣7針供試品重復性計算結果
|
峰1 Rg1 |
|
供試品1 |
供試品2 |
供試品3 |
供試品4 |
供試品5 |
供試品6 |
供試品7 |
平均值 |
SD |
RSD% |
|
保留時間 |
33.755 |
33.69 |
33.705 |
33.785 |
33.745 |
33.788 |
33.837 |
33.758 |
0.051 |
0.150 |
|
|
峰面積 |
131.802 |
131.307 |
131.923 |
132.136 |
132.972 |
132.87 |
132.272 |
132.183 |
0.589 |
0.446 |
|
|
峰2 Re |
|
供試品1 |
供試品2 |
供試品3 |
供試品4 |
供試品5 |
供試品6 |
供試品7 |
平均值 |
SD |
RSD% |
|
保留時間 |
34.548 |
34.487 |
34.5 |
34.57 |
34.535 |
34.587 |
34.622 |
34.550 |
0.048 |
0.138 |
|
|
峰面積 |
1909.479 |
1914.707 |
1910.289 |
1912.251 |
1915.361 |
1918.142 |
1917.844 |
1914.010 |
3.453 |
0.180 |
|
|
峰3 Rb1 |
|
供試品1 |
供試品2 |
供試品3 |
供試品4 |
供試品5 |
供試品6 |
供試品7 |
平均值 |
SD |
RSD% |
|
保留時間 |
54.923 |
54.895 |
54.87 |
54.895 |
54.87 |
54.918 |
54.907 |
54.897 |
0.021 |
0.039 |
|
|
峰面積 |
4592.244 |
4604.912 |
4600.139 |
4605.279 |
4614.771 |
4623.34 |
4625.138 |
4609.403 |
12.166 |
0.264 |
7 結論
采用悟空儀器 K2025高效液相色譜儀對西洋參中的人參皂苷Rb1、Rg1、Re進行測定，實驗結果表明，在連續梯度洗脫條件下，連續進樣7針對照品及供試品Rg1、Re、Rb1保留時間RSD均小于0.20%；連續進樣7針對照品及供試品Rg1、Re、Rb1峰面積RSD均小于0.50%，滿足藥典小于2.0%的要求。因此，使用悟空儀器 K2025的高效液相色譜儀測定西洋參中的人參皂苷Rb1、Rg1、Re有良好的重復性。
