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              高效液相色譜法測定關黃柏中的鹽酸小檗堿及鹽酸巴馬汀
              2020-09-25
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              關黃柏性寒、味苦,可以清熱燥濕,瀉火除蒸,解毒療瘡。關黃柏被收錄于2020年版《中國藥典》中,有陰虛火旺,盜汗骨蒸的功效。


              功效:煎劑或乙醇浸液關黃柏,對各種病原菌均有不同程度的抑制作用,并且關黃柏具有顯著而持久的降壓作用,其提取物100毫克/千克皮下注射,對阿司匹林或結扎幽門引起的胃潰瘍有顯著抑制作用,對水浸法應激性潰瘍也有效。


              關黃柏也可以對抗激素的不良反應,如果長期服用大量激素導致出現煩躁、抑郁的情況時,可以使用關黃柏來進行緩解。



              在關黃柏中鹽酸小檗堿及鹽酸巴馬汀是主要的活性成分。其中鹽酸小檗堿對痢疾桿菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、金葡菌、鏈球菌、傷寒桿菌及阿米巴原蟲有抑制作用。鹽酸巴馬汀具有抗細菌感染、病毒感染、真菌感染的作用。


              2020年版《中國藥典》規定,可利用高效液相色譜法測定制關黃柏中鹽酸小檗堿及鹽酸巴馬汀的含量以控制藥物質量。


              1 儀器與試劑

              2.1儀器

              悟空wooking K2025高效液相色譜儀,超聲波清洗儀,分析天平  


                     

              2.2試劑

              乙腈,水,磷酸二氫鈉,磷酸

              2 實驗方法

              3.1對照品溶液的制備

              分別稱取鹽酸小檗堿及鹽酸巴馬汀各5mg60%乙醇溶液定容至100mL。

              3.2 樣品前處理

              取本品粉末約0.2g,精密稱定,置50mL量瓶中,加入60%乙醇40mL,超聲處理(功率250W,頻率40kHz45分鐘,放冷,加60%乙醇至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

              3.3色譜參考條件

              儀器高效液相色譜儀:K2025 P2二元高壓輸液泵、K2025 AS自動進樣器、K2025 CO柱溫箱、K2025 UVD紫外-可見光檢測器;

              流動相:A:乙腈;B0.1%磷酸水溶液(加入磷酸二氫鈉使其達到0.02mol/L的濃度)

              柱溫:35℃;

              進樣量:10μL;

              流速:1mL/min;

              波長:345nm;

              梯度洗脫程序見表1

              1 梯度洗脫程序

              時間/min

              A%(乙腈)

              B%0.1%磷酸溶液(加入磷酸二氫鈉使其達到0.02mol/L的濃度)

              0

              25

              75

              20

              25

              75

              40

              65

              35

              45

              90

              10

              50

              90

              10

              50.1

              25

              75

              65

              25

              75

              3 結果與討論

              4.1實驗結果

              按照上述色譜條件進行采集,對照品溶液色譜圖和樣品色譜圖如下:

              1)對照品溶液重復性


               

              圖1 對照品溶液進樣7針的重復性

              2 對照品溶液進樣7針重復性數據統計

               

              2)供試品溶液重復性

               

              圖2 供試品溶液進樣7針的重復性

              3供試品溶液進樣7針重復性數據統計

               


              4.2結論

              保留時間以及峰面積的RSDn=7)均小于0.3%,滿足《中國藥典2020年版》小于2.0%的要求,因此,使用wooking K2025的高效液相色譜儀測定關黃柏中鹽酸小檗堿及鹽酸巴馬汀有良好的重復性。

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