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              抗病毒藥物中利巴韋林的檢測 高效毛細管電泳法
              2020-12-29
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              利巴韋林又名病毒唑,是廣譜強效的抗病毒藥物,屬合成核苷類藥,對許多DNA和RNA病毒有抑制作用。

              美國食品藥物管理局只許可用于配合長效干擾素治療丙肝、人類呼吸道融合病毒,和某些出血熱的治療。利巴韋林1970年由ICN制藥公司Joseph T. Witkowski合成。

              美國食品藥物管理局明確指出利巴韋林不適合用來治療流感,并且嚴格明確適應癥,但濫用利巴韋林來治療各種病毒感染的情況在中國十分普遍 。

              馬伊琍曾在2015年3月發過的一條微博,質疑國內濫用利巴韋林,受到許多網友的關注,大家對于利巴韋林的評價褒貶不一。

               

              到目前為止,利巴韋林顆粒物并沒有被禁止使用,還是能夠在藥房購買到的。

              利巴韋林顆粒物的忌諱并不是很多,對治療藥物成份皮膚過敏的病人嚴禁應用,孕婦、本身免疫性肝炎病人嚴禁服藥。利巴韋林顆粒物有一定的毒副作用,能夠造成溶血性貧血,其他普遍的副作用有惡心、嘔吐、疲憊、頭痛等。該治療藥物還能夠導致心肌損害,病人在吃藥過程中假如出現心臟病惡變的狀況,要馬上斷藥。

               

               

              利巴韋林(Ribavirin),化學名為1-β-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺,分子式為C8H12N4O,為白色或類白色結晶性粉末,無臭,在水中易溶,在乙醇中微溶,在乙醚或二氯甲烷中不溶,為抗非逆轉錄病毒藥。

              中國衛生行業標準《WS/T 686-2020消毒劑與抗抑菌劑中抗病毒藥物檢測方法與評價要求》中給出了兩種利巴韋林的檢測方法:電滲流反轉的毛細管電泳法和超高效液相色譜-串聯質譜確證方法。相較于超高效液相色譜-串聯質譜確證方法,電滲流反轉的毛細管電泳法具有前處理簡單、定量快速準確、精密度高等優勢,是抗病毒藥物中利巴韋林檢測的理想手段。


              1 儀器與試劑

              1.1儀器

              高效毛細管電泳HPCE512,渦旋混合器,分析天平,超聲波清洗機。         

              1.2試劑

              硼砂,硼酸,十六烷基三甲基溴化銨CTAB),氫氧化鈉。

              2 實驗方法

              2.1溶液配制

              1緩沖液的制備

              運行緩沖液配制:60mmol/L硼砂+100mmol/L硼酸+0.5mmol/L CTAB

              分別稱取0.309g硼酸、1.144g硼砂和0.009g CTAB ,置于同一離心管中,加水至40mL振搖溶解,再加水至50mL刻度,混勻備用。

              樣品提取液配制:將運行緩沖液稀釋10倍即可。

              2對照品溶液的制備

              準確稱取10mg利巴韋林對照品,置于10mL 離心管中,用水稀釋、定容至刻度,即利巴韋林的濃度為1000mg/L。將1000mg/L利巴韋林儲備液稀釋10倍制成100mg/L利巴韋林工作液。

              標準系列的配制:用樣品提取液稀釋工作液,配制成利巴韋林濃度為1.5mg/L 、5mg/L、10mg/L、20mg/L50mg/L的系列標準溶液。

              2.2 樣品前處理

              稱取0.5 g(精確至1 mg)試樣于10 mL具塞帶刻度離心管中,加入樣品提取溶液至10 mL 刻度,加入1至2顆玻璃珠,渦旋混勻至溶液呈均勻狀態,超聲10 min,備用。

              2.3電泳條件

              儀器: 高效毛細管電泳儀HPCE512:配備214nm濾光片的紫外檢測器;

              毛細管總長度:61.1cm;

              毛細管分離長度:48.8cm;

              毛細管內徑:50μm;

              檢測波長:214nm;

              毛細管溫度:25℃;

              進樣盤溫度:25℃;

              分離電壓:28kV-–+);

              進樣壓力及時間:0.5psi,20s;

              分離時間:6min;

              運行緩沖液60mmol/L硼砂+100mmol/L硼酸+0.5mmol/L CTAB;

              樣品提取液將運行緩沖液稀釋10倍即可;

              新毛細管在使用前分別用純甲醇沖洗20min,1mol/L NaOH 沖洗20min,超純水沖洗5min,運行緩沖液沖洗5min。每次進樣前依次用純甲醇沖洗2min,1mol/L NaOH 沖洗2min,超純水沖洗2min,運行緩沖液沖洗2min,以保證遷移時間和峰面積的重現性。

              3 結果與討論

              3.1實驗結果

              1校準曲線及檢出限

              配制利巴韋林濃度為1.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L50mg/L的系列標準溶液,214nm條件下進樣,外標法定量,質量濃度與校正峰面積具有良好的線性關系。實驗得到的線性方程為y=0.0017x+0.0008,R20.9996,檢出限為0.2mg/L。

              2儀器精密度

              為了驗證儀器的穩定性,將利巴韋林濃度為5mg/L的標準溶液進樣7次,考察儀器精密度,結果見表1。


              表1 儀器精密度(n=7)


               

              3方法精密度

              為了驗證該方法的可靠性,將某利巴韋林藥物提取后連續進樣7次,結果見表2。


              表2 方法精密度(n=7)

              4實際樣品分析

              選取2種利巴韋林藥物樣品,提取后稀釋相應倍數上機分析,利巴韋林藥物提取物的電泳圖如圖1所示。

                

              1利巴韋林藥物提取物的電泳圖(下圖為20mg/L利巴韋林標準溶液的電泳圖,中圖為利巴韋林顆粒提取物稀釋100倍后的電泳圖,上圖為利巴韋林片提取物稀釋1000倍后的電泳圖)

              3.2結論

              使用高效毛細管電泳儀檢測抗病毒藥物中的利巴韋林,前處理簡單,檢出限達0.2mg/L,精密度高,定量快速準確。與超高效液相色譜-串聯質譜法相比,經濟快速,可作為抗病毒藥物中利巴韋林檢測的理想手段。

               

              參考文獻

               WS/T 686-2020消毒劑與抗抑菌劑中抗病毒藥物檢測方法與評價要求

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